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當(dāng)前位置：課件009首頁 >> 職教研究 >> 專業(yè)論文 >> HPLC法測血清奧氮平濃度

HPLC法測血清奧氮平濃度 （作者未知）　2010/8/19 　　 【摘要】 用高效液相色譜法測定血清中奧氮平的藥物濃度，方法簡便、快速、靈敏、特異，適用于臨床常規(guī)和研究應(yīng)用。 　　 【關(guān)鍵詞】 高效液相色譜法 奧氮平 　　 奧氮平為苯并異 唑衍生物，是新一代的抗精神病藥物，并已廣泛應(yīng)用于臨床，因而在臨床上誤服、服毒自殺時(shí)有發(fā)生。為了配合臨床上的急救以及使給藥方案更加合理化，我們建立了奧氮平的液相色譜定性定量的分析方法。 　　 1 材料和方法 　　 高效液相色譜法在藥物分析中的應(yīng)用是近年來飛速發(fā)展的新技術(shù)。目前，用HPLC法快速測定血中奧氮平濃度的方法國內(nèi)報(bào)道甚少，我們在參考國外有關(guān)文獻(xiàn)資料的基礎(chǔ)上結(jié)合臨床實(shí)際，試圖在國內(nèi)首先建立一個(gè)取樣量少、分析周期短、靈敏度高的實(shí)驗(yàn)方法，以滿足臨床實(shí)際的需要。 　　 1.1 實(shí)驗(yàn)部分 　　 1.1.1 儀器及試劑 　　 (1)儀器 美國惠普HP1050高效液相色譜儀伴惠普HP1050紫外分光檢測儀及色譜工作站。色譜柱為200×4.6mm不銹鋼柱，內(nèi)充5μm Spherisorb C18 (34/73)。 　　 (2)標(biāo)準(zhǔn)物 奧氮平標(biāo)準(zhǔn)對照品。 　　 (3)溶劑 甲醇；三氯乙酸CCl3COOH；乙酸乙酯CH3COOC2H5；四硼酸鈉Na2B4O7•10H2O；磷酸氫二鈉Na2HPO4•12H2O；水為雙重蒸餾水。 　　 1.1.2 試劑配制 　　 （1）標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液 用雙重蒸餾水配成1mg/ml溶液，4℃保存。 　　 （2）標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液 用雙重蒸餾水稀釋成100μg/ml溶液，4℃保存。 　　 （3）50mmol/L Na2HPO4緩沖液 準(zhǔn)確稱取8.9535g Na2HPO4•12H2O于500ml容量瓶中加雙蒸水至刻度。 　　 （4）0.05mmol/L四硼酸鈉溶液 準(zhǔn)確稱取1.90685g Na2B4O7•10H2O于100ml容量瓶中加雙蒸水至刻度。 　　 （5）準(zhǔn)確稱取10g CCl3COOH于100ml容量瓶中加雙蒸水至刻度。 　　 （6）流動(dòng)相 取甲醇、雙重蒸餾水按70:30的比例（v/v）配制，用前超聲波脫氣。 　　 1.1.3 實(shí)驗(yàn)方法 　　 （1）色譜條件 　　 分析柱：色譜柱：Spherisorb-C18 4.6×200mm。 　　 流動(dòng)相流速：1ml/min。 　　 檢測波長：276nm。 　　 滿量程吸光度：0.02。 　　 記錄儀紙速：4mm/min。 　　 柱溫：室溫。 　　 （2）病人標(biāo)本收集和保存 　　 病人服用固定劑量達(dá)穩(wěn)態(tài)血藥濃度后，于清晨服藥前取肘或頸靜脈血2ml，及時(shí)分離出血清。不能及時(shí)測定的血清密封后冰凍保存。 　　 （3）樣品的預(yù)處理 　　 ①取血清1ml，加入10%三氯乙酸1ml，在旋渦混合器上混合振蕩2分鐘。 　　 ②在3000r/min離心機(jī)上離心5min后，取出上清液，加入乙酸乙酯/0.05mol/L四硼酸鈉（50:25 v/v）振蕩8min，經(jīng)3000r/min 離心5min后，取上清液，N2 60℃吹干。殘?jiān)��?00μl流動(dòng)相溶解，取20μl進(jìn)行液相色譜分析。 　　 2 計(jì)算 　　 測出藥物的峰面積，以血清應(yīng)用液的峰面積為自變量，濃度為因變量，算出相關(guān)系數(shù)及回歸方程，用標(biāo)本的峰面積由回歸方程算得結(jié)果。 　　 3 結(jié)果 　　 3.1 色譜行為 在本實(shí)驗(yàn)條件下，奧氮平保留時(shí)間為4.9min。 　　 3.2 線性關(guān)系及檢測限 在空白血漿中分別添加奧氮平使血藥濃度相當(dāng)于2、5、10、20g/L,在上述實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行分析，所得數(shù)據(jù)經(jīng)計(jì)算機(jī)進(jìn)行回歸，得到峰面積A與質(zhì)量濃度C（g/L）的關(guān)系： 　　 A=1.78×104+0.12×104C；相關(guān)系數(shù)為0.99。 　　 3.3 回收率與精密度 配制含奧氮平質(zhì)量濃度分別為2、5、10、20 g/L 的標(biāo)準(zhǔn)血漿樣品各五份，在上述實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行分析，測得血漿中奧氮平回收率；另取上述四種質(zhì)量濃度標(biāo)準(zhǔn)血漿，對每一質(zhì)量濃度當(dāng)日測定5次，求得日內(nèi)相對平均偏差；四種質(zhì)量濃度的血漿放置于冰箱保存，每天測1次，連續(xù)測定5次，求得日間平均相對偏差 　　 3.4 檢測波長 對奧氮平的標(biāo)準(zhǔn)溶液（g/L）進(jìn)行全波長掃描，在276 nm外有較強(qiáng)的吸收，故選定檢測波長為278 nm。 　　 4 討論 　　 4.1 本文（未完，下一頁） 　　 頁碼選擇：1　2

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