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黃連解毒湯治療大鼠急性肝損傷的實驗研究
（作者未知） 2010/8/19
【摘要】 目的 觀察黃連解毒湯對D-Galn誘導的大鼠急性肝損傷的治療作用及中藥的量效關系。 方法 32只SD大鼠，雌雄各半，隨機分為正常組，模型組，黃連解毒湯低劑組，高劑組；除空白組外，其余各組均以1000 mg/kg D-Galn腹腔注射造模，空白組則以等量NS腹腔注射；造模后立即對中藥組給予相應濃度中藥10ml/kg灌胃，每日一次，余組則以等量NS灌胃。染毒24h后，股動脈取血，測血清ALT,AST,并解剖肝臟，光鏡下觀察其病理變化，操作同前。 結果 模型組與正常組相比，模型組ALT、AST活性明顯增高；治療組與模型組相比，治療組轉氨酶活性降低，差異有統(tǒng)計學意義（均p＜0.05）；兩治療組間相比，轉氨酶活性差異無統(tǒng)計學意義。肝臟病理組織學檢查顯示，治療組肝細胞壞死及炎細胞浸潤程度均較模型組減輕。 結論 對1000mg/kgD-Galn誘導的大鼠急性肝損傷，黃連解毒湯干預24h后，有一定的治療作用。
【關鍵詞】 黃連解毒湯 急性肝損傷 D-氨基半乳糖胺 量效關系
黃連解毒湯方出自《肘后備急方》，名見《外臺秘要》，由黃芩、黃連、黃柏、梔子四藥組成，有清熱燥濕、瀉火解毒的功效，主治三焦火毒證，尤其對熱毒熾盛證型的急性肝炎，有一定的臨床效果[1]。有學者已對該復方進行了研究[2]，但為預防性研究，與臨床實際應用有一定的差距。本實驗重點觀察該方對D-Galn誘導的大鼠急性肝損傷的治療作用。
1 材料與方法
1.1 材料
1.1.1 藥物：D-氨基半乳糖（D-galactosanine, D-Galn）由sigma公司提供，批號7499531，黃連解毒湯的四味藥材為中藥免煎劑型，購自成都中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院中藥房，各藥物的劑量比遵守《肘后備急方》原方比例，以蒸餾水煮沸沖為不同濃度的中藥湯劑，其中低劑量組 (T1組) 濃度為0.49g/ml，高劑量組（T2組）濃度為0.99g/ml。
1.1.2 動物：清潔級SD大鼠32只，體重200±20g，雌雄各半，由四川大學華西動物實驗中心提供,飼養(yǎng)于成都中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院病理生理實驗動物中心，自然明暗周期，室溫21～23℃。
1.1.3 主要試劑：肝功ALT、AST 試劑盒購自中生北控生物科技股份有限公司，批號080211，10%福爾馬林緩沖液由華西醫(yī)科大學藥理實驗室提供。
1.1.4 儀器：KDC-2046低速冷凍離心機（科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司），Sartorius ,R180-D電子分析天平，日立7170全自動生化分析儀，Leica DM4000型顯微圖像分析系統(tǒng)。
1.2 方法
1.2.1 動物分組及給藥量
清潔級SD大鼠32只，雌雄各半，適應性喂養(yǎng)3天后，稱重編號。隨機分為4組，每組8只，即正常組（C組）、肝損傷模型組（M組，1000mg/kgD-Galn）黃連解毒湯低劑量組（T1組，0.49g/ml，臨床等效劑量）、黃連解毒湯高劑量組（T2組，0.99g/ml，2倍臨床等效劑量）。
1.2.2 操作過程：
試驗前一天對大鼠稱重，禁食不禁水。實驗前D-Galn以無菌NS配制為10%的濃度，根據(jù)文獻資料[3]及預試驗提示，各組（除C組外）以1000mg/kg D-Galn腹腔注射，C組以等量NS腹腔注射；治療組造模后，立即以中藥10ml/kg灌胃，每日1次，M組、C組則以等量NS灌胃，染毒24h后，對所有動物股動脈放血取血，置于-20℃冰箱待檢，隨后斷頸處死，解剖，觀察肝臟大體形態(tài)后，取肝臟右葉組織塊置于10%甲醛溶液中固定。
離心取血清，全自動生化分析儀以連續(xù)監(jiān)測法檢測血清ALT,AST，肝臟病理則送四川大學華西醫(yī)學中心藥理實驗室常規(guī)方法制作HE切片，以Leica顯微圖像分析系統(tǒng)，以200×的放大率觀察。
1.2.3 統(tǒng)計方法
據(jù)SPSS13.0統(tǒng)計分析，數(shù)據(jù)以x-±s表示，采用Dunnett’s檢驗，α＝0.05。
2 結果
2.1對血清ALT、AST的影響：24h時，兩治療組均有降低血清轉氨酶的作用，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
2.2肝組織病理學影響
光鏡下觀察，C組：肝索排列整齊，小葉結構完整，肝細胞無變性壞死。M組：肝索排列欠齊，肝細胞脂肪樣變，點狀壞死，血竇內充血，小葉內廣泛炎性浸潤。T1組:肝索排列整齊，肝細胞少量變性，血竇內少量充血，小葉內點灶狀炎性浸潤。T2組：肝索排列較齊，肝細胞脂肪變性明（未完，下一頁）
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