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健康水貂腸道內(nèi)益生乳酸菌的篩選、分離、鑒定及應(yīng)用研究
楊琛杰 2011/3/14
摘要：通過對健康水貂全腸道內(nèi)容物中附著不同微生物的提取，分離篩選出益生微生物，對其培養(yǎng)并做生長特性檢測，通過不同溫度生長實驗、不同時間OD值測定、產(chǎn)酸性實驗、抑菌性實驗、菌株安全性檢測來篩選目的菌株。進(jìn)一步對目的菌株進(jìn)行菌種鑒定，做鏡檢、革蘭氏染色，過氧化氫酶實驗，運動性實驗，碳水化合物發(fā)酵產(chǎn)酸實驗（23種糖），溫度實驗，16S rDNA序列分析。最后選擇優(yōu)良菌株作為日糧佐劑。
關(guān)鍵字： 水貂 腸道 益生菌 乳酸菌 分離 鑒定
Abstract: By extracting the attachment of different microorganisms in the intestines of healthy mink, Separating and screening out of which probiotics, Culture for them and do Growth Characteristics Test for screening the purpose bacteria as follow: Growth experiments at different temperatures, OD values measured at different time, Acid production experiments, Inhibition of bacteria experiment, Strains security checks. Further, for the purpose of species identification of bacteria as follow: Microscope detection, Gram Staining, Catalase test,motion test, Carbohydrate ferment acid test(23 kinds of sugar), Temperature Experiment, 16S rDNA Sequence Analysis. Final choice of diet adjuvant use the fine strains of bacteria.
Keywords： Mink, Intestinal ,Probiotics, lactobacillus,Separating, Screeing
1 益生微生物研究的興起
在生物技術(shù)迅猛發(fā)展的今天, 一門研究正常微生物群的結(jié)構(gòu)、功能及其與宿主相互依賴和相互制約關(guān)系的生命科學(xué)——微生態(tài)學(xué)（Microecology）正在興起。隨著微生態(tài)學(xué)理論研究的不斷深入，微生態(tài)制劑（或稱微生態(tài)調(diào)節(jié)劑）也隨之迅速發(fā)展起來。微生態(tài)制劑中的活性成分主要為益生菌（Probiotics），也有譯為“益生素”，“原生菌”等。它是從早在1907年梅契尼柯夫（Metchnikoff）提出的發(fā)酵乳制品有助于健康長壽的理論中發(fā)展而來的。[1]英文Probiotics一詞源于希臘語，意思是“為了生命”（for live），與Antibiotics相對立。而它的現(xiàn)代定義則是最早在1965年被Lilley和Stillwell闡述為“有一種微生物分泌的刺激其它微生物生長的物質(zhì)或組織提取物�！盵2] 此后，隨著益生菌研究的深入，益生菌定義也逐漸被完善，益生菌數(shù)量及其保健功效方面也都得到進(jìn)一步豐實。[3] 現(xiàn)在一般認(rèn)為：益生菌劑是含生理活性菌或死細(xì)胞(包含代謝產(chǎn)物與細(xì)胞組成)，[4] [5] 攝取后可改善粘膜表面菌群或酶的平衡，或刺激機(jī)體的特異性或非特異性免疫力的微生物制劑。[6]
自70 年代德國漢堡成立第一所微生態(tài)學(xué)研究所起，微生態(tài)學(xué)逐漸發(fā)展成為一門新興學(xué)科而令人矚目。[7] 微生態(tài)學(xué)是生命科學(xué)的分支，作為一門研究生物體正常微生物群與其宿主相互依賴、相互制約規(guī)律的科學(xué)，[8] 它涉及生物體與其內(nèi)環(huán)境（包括微生物、生物化學(xué)和生物物理環(huán)境)相適應(yīng)的問題，[9] 從最初的對雙岐桿菌、乳桿菌、大腸桿菌等活菌的生態(tài)療法到現(xiàn)在的多種微生態(tài)制劑的問世，[10] 無論從數(shù)量和規(guī)模以及市場效益方面來看，都有著誘人的前景。
2 微生態(tài)制劑的優(yōu)越性
據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計，中國是濫用抗生素最嚴(yán)重的國家之一，抗生素的濫用已造成一系列的問題，[11] 由于長期以來使用的抗生素種類比較多，引起的不良反應(yīng)也會涉及動物體的每一個系統(tǒng)。 [12] 在服用抗生素的同時,也殺滅了胃腸道中的正常菌群,導(dǎo)致胃腸道內(nèi)的微生態(tài)平衡失調(diào),也會使細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性，[13] 細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性的速度遠(yuǎn)遠(yuǎn)快于我們新藥開發(fā)的速度，引起菌群失調(diào)，二重感染以及動物細(xì)胞免疫、體液免疫功（未完，下一頁）
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