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北五味子中4種木脂素類化合物的高效液相色譜法同時測定
（作者未知） 2011/4/25
【摘要】 目的建立高效液相色譜法同時測定北五味子中4種木脂素類化合物的分析方法。方法考察流動相組成及配比、檢測波長、柱溫、流速和進樣量對測定的影響，確定了最佳色譜條件：流動相為乙腈-水，梯度洗脫程序為：0～25 min乙腈∶水=50∶50(V/V);25～35 min線性變化到70∶30(V/V)，并保持5 min;40～44 min再線性變化到80∶20(V/V);DAD檢測器，檢測波長為五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素216 nm，五味子酯甲222 nm;柱溫25℃;流速0.8 ml/min;進樣量10.0 μl。結(jié)果在最佳色譜條件下，4種化合物標準曲線的線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為0.999 4～0.999 8，各組分的檢出限為0.04～0.05 μg/ml，平均回收率為90.23～95.24%，相對標準偏差為3.2%～4.9%。結(jié)論該方法靈敏，準確，實現(xiàn)了對4種木脂素類化合物的同時測定。
【關(guān)鍵詞】 高效液相色譜法;北五味子;木脂素
五味子為木蘭科植物五味子的成熟果實，具有收斂固澀、益氣生津、補腎寧心的功效。北五味子主產(chǎn)于吉林、遼寧、黑龍江，具有很高的藥用價值[1]。建立一種高效、快速、準確測定五味子中有效成分的方法，對五味子的質(zhì)量進行檢測跟蹤[2，3]，意義將非常重大，同時也為北五味子規(guī)范化種植基地的藥材品質(zhì)評價提供依據(jù)�，F(xiàn)在國內(nèi)外對于木脂素的測定方法研究的比較多[4~7]，但各種方法都有不同程度的缺陷。本研究采用高效液相色譜法對五味子中4種木脂素類化合物的同時測定進行了系統(tǒng)的研究，實現(xiàn)了4種化合物的同時測定。經(jīng)實際樣品檢測和分析性能研究表明，方法簡單、快速、準確、可靠。
1器材
1.1儀器與試劑Agilent HP1100高效液相色譜儀(配有四元梯度泵、在線真空脫氣機、自動進樣器、柱溫箱、二極管陣列檢測器);色譜柱：迪馬公司 Diamonsil(鉆石)C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm); 超純水發(fā)生系統(tǒng)(MILLIPORE公司);LG10-2.4A型高速離心機(北京醫(yī)用離心機廠);C18固相萃取小柱(3 ml，100 mg，waters公司);TurboVap LV氮氣吹干儀(Zymark公司);Ф13 mm 0.22 μm一次性微孔樣品過濾膜(希波氏);SHZ-D(Ⅲ)循環(huán)水式真空泵(鞏義市英峪予華儀器廠)。
1.2試劑與標準品甲醇，色譜純(Fisher Chemicals公司);標準品，五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素，均為化學(xué)對照品(中國藥品生物制品檢定所);乙腈，色譜純(Fisher Chemicals公司);丙酮，分析純(國藥集團化學(xué)試劑有限公司);苯，分析純(沈陽市新西試劑廠);正己烷，分析純(國藥集團化學(xué)試劑有限公司);環(huán)己烷，分析純(國藥集團化學(xué)試劑有限公司)。標準儲備液的配制：分別準確稱取五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素標準品0.010 0 g于小燒杯中，加入乙腈溶解，轉(zhuǎn)移于10 ml容量瓶中，定容至刻度，混勻，制得各儲備液的濃度均為1 000 μg/ml。北五味子1號和北五味子2號藥材，均由遼寧金世中藥材科技開發(fā)有限公司提供。
1.3色譜條件色譜柱為迪馬公司 Diamonsil(鉆石)C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流動相為A乙腈，B水; 梯度洗脫程序：0～25 min流動相配比為乙腈∶水=50∶50 (V/V);25～35 min流動相比例線性變化到70∶30(V/V);35～40 min保持乙腈∶水=70∶30(V/V);40～44 min再線性變化到80∶20(V/V)。
2方法
2.1樣品預(yù)處理C18固相萃取柱活化：分別用10 ml甲醇和10 ml水活化，保持水的液面為2 mm左右時上樣。
準確稱取0.100 0 g樣品于比色管中，加入10 ml乙腈超聲40 min左右，將所得液體和固體混合物過濾，得到澄清溶液和固體殘渣，用乙腈將固體殘渣洗滌數(shù)次，合并乙腈液和原澄清溶液，將合并液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，加入10%甲醇水溶液10.00 ml溶解，取出1.00 ml慢慢加入到已活化的C18固相萃取柱中，全程的層析過程中不應(yīng)使柱干涸，用5 ml水做淋洗液洗柱，棄去全部淋洗液，用5 ml甲醇做洗脫液洗柱，收集洗脫液，用氮氣吹干儀吹干洗脫液，然后加入1.00 ml乙腈溶解，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜過濾后待測。
2.2儀器操作按分析方法中設(shè)定的流動相配比、流速、柱溫、檢測器溫度平衡整個液相色譜系統(tǒng)。待基線完全穩(wěn)定后進樣分析，同時在Offline下進行數(shù)據(jù)處理與報告編輯。每次做完實驗后應(yīng)先用20倍柱體積的（未完，下一頁）
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