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繼代培養(yǎng)期不同培養(yǎng)基對(duì)鐵皮石斛莖芽生長(zhǎng)的影響
六盤水職業(yè)技術(shù)學(xué)院實(shí)驗(yàn)中心 吳曉榮 2016/5/23 21:08:45
摘要：傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)有記載為性味功效：味甘，性微寒。生津養(yǎng)胃；滋陰清熱；潤(rùn)肺益腎；明目強(qiáng)腰。國際藥用植物界稱其為“藥界大熊貓”；被民間稱作“救命仙草”[1]。今年來應(yīng)人們長(zhǎng)期挖掘以及其他生長(zhǎng)環(huán)境因素，鐵皮石斛的生長(zhǎng)發(fā)育受到了嚴(yán)重影響，資源逐漸枯竭，因此，本文重點(diǎn)研究繼代培養(yǎng)期中使用不同培養(yǎng)基對(duì)于鐵皮石斛莖芽生長(zhǎng)的影響，以此提高鐵皮石斛的移栽成活率。
關(guān)鍵詞：繼代培養(yǎng)期；鐵皮石斛；培養(yǎng)基
鐵皮石斛為蘭科石斛蘭屬多年生草本植物，具有益胃生津、滋陰清熱的功能。石斛屬實(shí)蘭科中最大屬之一。鐵皮石斛一般生長(zhǎng)在海拔100—3000米的高度之間。多見附著于樹上或巖石之上，生長(zhǎng)環(huán)境多為溫暖、潮濕、和半陰暗環(huán)境，不耐寒。鐵皮石斛對(duì)生長(zhǎng)的自然環(huán)境要求極為苛刻，而且自然繁殖能力低、生長(zhǎng)緩慢。在目前，已嚴(yán)令禁止采摘。
一、實(shí)驗(yàn)材料與實(shí)驗(yàn)方法
（一）材料
鐵皮石斛種子播于無菌玻璃瓶后，通過組織培養(yǎng)誘導(dǎo)產(chǎn)生原球莖。在超凈工作臺(tái)上取出瓶?jī)?nèi)幼苗，切除根系，取2/3 以上莖芽作為試驗(yàn)材料。在基本培養(yǎng)基中加入白糖 3.5％，瓊脂粉 0.85％，pH 值為 5.8～6.0，附加 6-BA（6-芐基氨基嘌呤）、NAA（萘乙酸）的培養(yǎng)基。試驗(yàn)共設(shè)4個(gè)處理，分別為：MS+0.1 mg/L NAA+2 mg/L6-BA（A），N6+0.1 mg/L NAA+2 mg/L 6-BA（B），1/2MS+0.1mg/L NAA+2 mg/L 6-BA（C），以MS為對(duì)照（CK），不添加任何激素。每個(gè)處理50瓶，重復(fù)3次以上。
（二） 方法
培養(yǎng)基置于培養(yǎng)室進(jìn)行光照培養(yǎng)，每天光照 12 h，光照強(qiáng)度 1 800～2 000 lx，溫度（25±2） ℃，培養(yǎng) 2 個(gè)月后觀察記錄鐵皮石斛莖芽增殖結(jié)果及生長(zhǎng)情況。將無菌瓶苗生長(zhǎng)正常的莖芽切下，轉(zhuǎn)入繼代增殖培養(yǎng)基，每次培養(yǎng) 60 d，重復(fù) 3次，共培養(yǎng)180d。
（三）培養(yǎng)基選擇馬鈴薯-蔗糖-瓊脂培養(yǎng)基
20%馬鈴薯煮汁 1000ml 蔗糖20g 瓊脂18g把馬鈴薯洗凈去皮后，切成小塊。稱取馬鈴薯小塊200g，加水1000ml，煮沸20分鐘后，過濾。在濾汁中補(bǔ)足水分到1000ml，即成20%馬鈴薯煮汁。在馬鈴薯煮汁中加入瓊脂和蔗糖，煮沸，使它溶解后，補(bǔ)足水分，分裝，滅菌，備用。使用該培養(yǎng)基對(duì)pH值要求不嚴(yán)格，可以不測(cè)定。綜合馬鈴薯培養(yǎng)基20%馬鈴薯煮汁1000 ml 磷酸二氫鉀3g 硫酸鎂1.5g 葡萄糖20g 維生素10mg 瓊脂18g先配制20%馬鈴薯煮汁，方法同上。在煮汁中加入上述各種組分，加熱溶解后補(bǔ)足水分，調(diào)整pH值到6。分裝，滅菌，備用。 該培養(yǎng)基用于培養(yǎng)和保存靈芝、平菇、香菇等食用菌菌種。
二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析
（一）實(shí)驗(yàn)結(jié)果
四種處理的實(shí)驗(yàn)結(jié)果非別為：MS+0.1mg/L NAA+2mg/L 6—BA培養(yǎng)基中莖芽生長(zhǎng)活力不足，葉片輕度黃化，以及生長(zhǎng)緩慢。N6+0.1 mg/L NAA+2 mg/L 6-BA培養(yǎng)基中莖芽生長(zhǎng)活力極差，葉片嚴(yán)重黃化，生長(zhǎng)遲緩，1/2MS+0.1mg/L NAA+2mg/L 6—BA培養(yǎng)基中莖芽增殖6.5倍，平均芽長(zhǎng)3.5cm，葉片生長(zhǎng)迅速，莖芽健康。
（二）結(jié)果分析
培養(yǎng)基的不同配比，對(duì)于鐵皮石斛莖芽的增殖倍數(shù)以及生長(zhǎng)速度有不同的影響，因培養(yǎng)基配比濃度不同，所以對(duì)于原球莖的增殖作用也不同，在低濃度下，原球莖的增殖速度和ABA濃度有關(guān)。添加物和碳源也是影響增殖的重要因素。培養(yǎng)基中加入適當(dāng)活性炭能有效增加和促進(jìn)原球莖的分化，利于生長(zhǎng)。
鐵皮石斛要完整的生長(zhǎng)要經(jīng)過誘導(dǎo)、增殖、分化、培育等時(shí)期，生長(zhǎng)因素和生長(zhǎng)環(huán)境要求也十分重要，因此，有效的培養(yǎng)基培養(yǎng)結(jié)果就成為栽種前的重要依據(jù)，本文研究結(jié)果顯示四種處理的實(shí)驗(yàn)結(jié)果非別為：MS+0.1mg/L NAA+2mg/L 6—BA培養(yǎng)基中莖芽生長(zhǎng)活力不足，葉片輕度黃化，以及生長(zhǎng)緩慢。N6+0.1 mg/L NAA+2 mg/L 6-BA培養(yǎng)基中莖芽生長(zhǎng)活力極差，葉片嚴(yán)重黃化，生長(zhǎng)遲緩，1/2MS+0.1mg/L NAA+2mg/L 6—BA培養(yǎng)基中莖芽增殖6.5倍，平均芽長(zhǎng)3.5cm，葉片生長(zhǎng)迅速，莖芽健康。對(duì)比可得，選擇 1/2MS+0.1 mg/L NAA+2 mg/L 6-BA 培養(yǎng)基進(jìn)行繼代培養(yǎng)，達(dá)到組培工廠化育苗水平，更有可能培養(yǎng)合格商品苗。組培苗根長(zhǎng)在0．5-1．0cm時(shí)是移植的最佳時(shí)期。栽培前，將鐵皮石斛組培苗放在室內(nèi)煉苗20～25天后，用清水洗凈組培苗根上的培養(yǎng)基，用0．1%的百菌清液消毒，以防組培苗根腐爛。栽培時(shí)，按15 cm×20 cm的株行距種植，種植時(shí)使根（未完，下一頁）
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