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芹菜甲素對(duì)D-半乳糖衰老模型小鼠的作用
（作者未知） 2009/10/11
（接上頁）8 50mM PBS加熱使VB充分溶解再加PH7.8 50mM PBS至500ml；
使用時(shí)�、�10ml②10ml③1ml用④定容至100ml。
紅細(xì)胞抽提液制備：
取尾血20ul加入2ml生理鹽水，2000rpm離心3分鐘，棄上清，沉淀加冰冷的雙蒸水0.2ml混勻，加入95%乙醇0.1ml，振蕩30s，再加入三氯甲烷0.1ml，置快速混合器抽提1min，4000rpm離心5min，分層，上層為SOD抽提液，中層為血紅蛋白沉淀物，下層為三氯甲烷，記錄上清液體積，用于SOD活性的測(cè)定。
2.2 過氧化脂質(zhì)含量的測(cè)定
原理：MDA（malondiadehycle）是細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化的終產(chǎn)物之一，測(cè)其含量可以間接估計(jì)脂質(zhì)過氧化的程度。1個(gè)丙二醛（MDA）分子與2個(gè)硫代巴比妥酸（TBA）分子在酸性條件下共熱，形成粉紅色復(fù)合物，該物質(zhì)在波長532nm有極大吸收峰，可用分光光度法進(jìn)行檢測(cè)。
儀器與試劑：
儀器：721分光光度計(jì)、微量加樣器、恒溫水浴鍋、普通離心機(jī)、混旋器、具塞離心管。
試劑：0.2M乙酸鹽緩沖液PH3.5
0.2M乙酸溶液 185ml
0.2M乙酸鈉溶液 15ml
1mmol/l四乙氧基丙烷（儲(chǔ)備液，4℃保存3個(gè)月），臨用前用水稀釋成10nmol/l
8.1%十二烷基磺酸鈉SDS
0.8%硫代巴比妥酸TBA
0.2M磷酸鹽緩沖液PH7.4
0.2M磷酸氫二鈉 1920ml
0.2M磷酸二氫鈉 480ml
樣品制備：取全血10ul加入0.5ml0.2M磷酸鹽緩沖液，2000rpm離心10分鐘，取上清液待測(cè)。
樣品測(cè)定：
試劑 空白管 樣品管 標(biāo)準(zhǔn)管
10ul全血上清夜 0.1ml
10nmol/l四乙氧基丙烷 0.1ml
8.1%SDS 0.2 ml 0.2 ml 0.2 ml
0.2M乙酸鹽緩沖液PH3.5 1.5 ml 1.5 ml 1.5 ml
0.8%TBA 1.5 ml 1.5 ml 1.5 ml
H2O 0.8 ml 0.7 ml 0.7ml
混勻，避光沸水浴60min，流水冷卻，于532nm處比色
計(jì)算：
過氧化脂質(zhì)（nmol/ml血液）=（B-A/F-A）×C×K
A：空白管吸光度
B：樣品吸光度
F：四乙氧基丙烷吸光度
C：四乙氧基丙烷濃度
K：稀釋倍數(shù)
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