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滲漉法提取白芷總香豆素的工藝研究
（作者未知） 2010/5/25
（接上頁）
將對照品和樣品在200～400 nm處分別進(jìn)行波長掃描,兩者在300 nm處有吸收,而且峰形變化平緩,有利于含量測定，因此以300 nm作為測定波長。
2.1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
分別精密吸取對照品溶液1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 ml，用甲醇定容至10 ml，以甲醇為空白，于300nm處測定吸光度。以濃度（C）為橫坐標(biāo)，吸光度（A）為縱坐標(biāo)作圖，得回歸方程：A=47.4C+0.017(r=0.999 7,n=5)。結(jié)果表明，歐前胡素對照品溶液濃度在5.22～15.66 μg/ml的濃度范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。
2.1.4 供試品溶液的制備與含量測定
精密量取提取液5 ml，水浴揮干溶劑，加入甲醇溶解并定容至50 ml，搖勻，作為供試品溶液，稀釋，以甲醇為空白，于300 nm處測定吸光度，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算白芷總香豆素含量。
2.2 提取工藝條件選擇
2.2.1 提取溶媒考察
為正交設(shè)計因素水平設(shè)計提供初步依據(jù)，對水和醇兩種溶媒進(jìn)行考察。稱取20 g白芷初粉（30目），分別用水和乙醇進(jìn)行提取，提取液濃縮并定容至一定體積，按含量測定方法計算水提液和醇提液中總香豆素的含量。結(jié)果見表1。 表1 不同提取溶媒的比較（略）
實驗結(jié)果表明，以乙醇作為提取溶劑，能提取較高含量的總香豆素，因此采用乙醇滲漉提取白芷總香豆素。
2.2.2 粒度考察
由于藥材的粒度與有效成分的提取效果有關(guān)，因此，我們分別選擇10，20，30目和40目的藥材進(jìn)行考察。以6倍量的95%乙醇，熱回流提取3次，1 h/次為提取條件，分別進(jìn)行提取，減壓回收乙醇，將提取液濃縮至一定體積，總香豆素的含量選擇適宜粒度的藥材進(jìn)行滲漉提取。結(jié)果見表2。表2 粒度的比較
上述結(jié)果表明，6倍量95%乙醇提取3次，1 h/次，粒度為20目時，白芷總香豆素含量為最大，因此，采用20目的藥材進(jìn)行下步工藝。
2.3 滲漉法提取白芷總香豆素工藝條件優(yōu)化
2.3.1 因素水平設(shè)計在對提取溶媒和粒度考察的基礎(chǔ)上，采用正交實驗法，選用L9（34）正交表，以乙醇濃度、乙醇用量、浸泡時間、滲漉速度為因素，各因素分別設(shè)計3個水平。2.3.2 提取方法與結(jié)果
稱取20 g白芷樣品（20目），乙醇潤濕2 h后裝柱，用以上各條件進(jìn)行實驗，收集滲漉液，測定含量。結(jié)果見表4。表4 正交實驗設(shè)計表及結(jié)果（略）
從直觀分析結(jié)果表明，滲漉法提取白芷總香豆素的影響因素主次順序為：A﹥B﹥C﹥D。方差分析結(jié)果表明，A因素的影響有顯著意義P﹤0.05，故確定提取最佳工藝為：A1B3C1D3，即8倍量的75%乙醇，浸泡8 h后，以0.5 ml/min的速度滲漉為最佳提取方案。
2.3.3 滲漉法提取最佳工藝條件優(yōu)化驗證
稱取20 g白芷樣品（20目），選取以上滲漉法提取的最佳提取條件提取，測定總香豆素含量為10.047 mg/g。按優(yōu)化工藝條件提取白芷香豆素，得到的總香豆素含量較高，因此可認(rèn)為優(yōu)化條件可行。
2.4 不同提取方法提取結(jié)果比較取白芷樣品（20目）4份，每份約10 g，精密稱定，以8倍量95%乙醇為溶劑，分別采用超聲波提取法、熱回流法、滲漉法，以及超臨界CO2萃取（萃取條件溫度50℃，壓力30 MPa，萃取3.5 h，分離壓力7.0 MPa）進(jìn)行提取，提取液經(jīng)過濾后定容至100 ml，測定總香豆素含量，結(jié)果見表6。表5 滲漉法提取香豆素方差分析（略）表6 不同提取方法的比較（略）
3 討論
香豆素成分是白芷的主要活性成分，經(jīng)實驗證明，歐前胡素是白芷香豆素的基礎(chǔ)成分之一，因此，本實驗采用歐前胡素作為對照品，于300 nm處測定白芷總香豆素含量，并以此作為評價指標(biāo)篩選最佳工藝，控制制劑質(zhì)量是可行的。
溶媒考察時，本著以工業(yè)生產(chǎn)制劑為目的，考慮到經(jīng)濟(jì)、安全等因素，因此該實驗僅對水和乙醇兩種溶媒進(jìn)行了考察。
在進(jìn)行粒度考察時（見表2），20目和40目的白芷藥材顆粒提取得到的總香豆素的含量差異不大，考慮到粉碎困難、節(jié)能降耗等因素，從生產(chǎn)的綜合效益出發(fā)，選擇20目的白芷藥材進(jìn)行提取。
經(jīng)研究，白芷香豆素雖可溶于沸水，但其中歐前胡素易于發(fā)生Claisen烯丙基重排，生成別歐前胡素，即使在真空中加熱也會引起這樣的變化［3］，因此，雖然熱回流法和滲漉法在提取效果上差別不大，但由于提取時間較長，溫度較高，不利于香豆素類成分的提取。因此，采用乙醇滲漉法是可取的。該方法最佳工藝條件的確定（未完，下一頁）
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