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雷公藤甲素對體外培養(yǎng)的變應性接觸性皮炎小鼠Th細胞Fas表達的影響
（作者未知） 2010/5/25
（接上頁）復激發(fā)1次，連續(xù)4次激發(fā)。最終1次24 h后觀察耳殼皮損嚴重度并切取皮膚及右耳做組織病理檢查。在HE切片下對炎性細胞（包括淋巴細胞，粒細胞）浸潤，表皮細胞間水腫，細胞內(nèi)水腫，網(wǎng)狀變性，表皮內(nèi)水皰，以及表皮壞死病理變化進行觀察，確定變應性皮炎小鼠模型成功。
2.2 ACD小鼠淋巴細胞的分離培養(yǎng)小鼠頸椎脫位處死，置70%乙醇中浸泡3 min，無菌取脾臟，200目不銹鋼網(wǎng)置于含Hanks液的平皿中（5 ml Hanks液），用注射器芯研磨脾，Hanks液沖洗過濾脾細胞，收集細胞懸液，1 500 r/min, 離心5 min，以RPMI-1640（含20%胎牛血清）10 ml懸浮細胞，計數(shù)，調(diào)整為2×106/ml濃度；培養(yǎng)板每培養(yǎng)孔加0.5 ml細胞，實驗工作液分3個終濃度，雷公藤紅素低、中、高濃度分別為0.1，1.0，10 μmol/L，每組設3個復孔�；靹蚝蠓湃牒�5% CO2的CO2溫箱內(nèi)，37℃，培養(yǎng)48h后進行實驗檢測。
2.3 Th細胞Fas表達檢測吸取培養(yǎng)孔內(nèi)細胞，移入10 ml離心管中，1 500 r/min, 離心5 min，吸棄上清液；用1 ml PBS重懸細胞，移入試管中；離心，棄上清液，洗滌細胞1次，吸棄上清液；每管分別加入1.25 μl PE anti-mouse CD95，5 μl APC-Cy7 anti-mouse CD4；振蕩，室溫避光保存30 min；加入500 μl 4%多聚甲醛，應用流式細胞儀進行檢測，經(jīng)488 nm激光激發(fā)，依CellQuest軟件，每個樣本獲取10 000個細胞。
2.4 統(tǒng)計學方法
實驗數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS11.0軟件處理，多組間的兩兩比較采用單因素方差分析。
3 結果
雷公藤甲素對體外培養(yǎng)ACD小鼠淋巴細胞Fas表達的影響 （略）
雷公藤甲素3個濃度組體外培養(yǎng)的ACD小鼠淋巴細胞Fas表達與對照組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），藥物高濃度組與中濃度和低濃度比較Fas表達水平顯著升高（P＜0.01），中濃度與低濃度比較表達水平差異具有顯著性（P＜0.05）。雷公藤甲素可以促進體外培養(yǎng)的ACD小鼠淋巴細胞Fas的表達，并且表達水平隨著藥物濃度的增加而增強，F(xiàn)as表達呈濃度依賴性。
4 討論
雷公藤甲素作為雷公藤中的主要活性物質，具有免疫抑制作用，能抑制淋巴細胞和腫瘤細胞，并誘導其凋亡。
Fas又稱CD95，是由325個氨基酸組成的受體分子，F(xiàn)as和配體FasL結合，可通過Fas分子啟動致死性信號轉導，最終引起細胞一系列特征性變化，使細胞死亡。Fas作為一種普遍表達的受體分子，可出現(xiàn)于多種細胞表面，大量研究結果表明Fas受體在凋亡事件中起傳導信號的作用。CD4分子分布在Th表面，在T細胞亞群的鑒別中具有重要意義。CD4陽性T細胞具有重要的免疫功能，CD4分子可與抗原提呈細胞表面的MHC-Ⅱ類抗原非多態(tài)部分相結合，協(xié)助Th細胞識別APC細胞表面外來抗原與MHC-Ⅱ類抗原的復合物［1］。雷公藤甲素3個濃度對體外培養(yǎng)的ACD小鼠Th細胞表面Fas表達均有促進作用（P＜0.01），兩兩比較顯示高濃度組均高于與中濃度和低濃度組Fas表達（P＜0.01），中濃度與低濃度比較表達水平差異具有顯著性（P＜0.05）。雷公藤甲素可以促進體外培養(yǎng)的ACD小鼠Th細胞Fas的表達，并且表達水平隨著藥物濃度的增加而增強，F(xiàn)as表達呈濃度依賴性。
ACD被認為是一種Ⅳ型變態(tài)反應，其發(fā)病過程主要涉及變應原與皮膚接觸形成變應原載體復合物；誘導皮膚中抗原提呈細胞處理并提呈變應原給T淋巴細胞；T淋巴細胞活化形成抗原特異致敏的T淋巴細胞；再次接觸相同變應原引發(fā)皮膚炎癥反應。細胞凋亡在致敏的T淋巴細胞的清除起到重要的作用［2］，促進體外培養(yǎng)的ACD小鼠Th細胞Fas的表達，可能是雷公藤甲素治療ACD的機理之一。
【參考文獻】
［1］Roberts AI, Devadas S, Zhang X,et al. The role of activation-induced cell death in the differentiation of T-helper-cell subsets［J］. Immunol Res. 2003，28(3):285.
［2］Scholz M, Cinatl J. Fas/FasL interaction: a novel immune therapy approach with immobilized biologicals［J］. Med Res Rev，2005，25(3):331.
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