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高效液相色譜法測定骨康口服液中補骨脂素和異補骨脂素的含量
（作者未知） 2010/5/25
（接上頁）圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，異補骨脂素在88～616ng范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，回歸方程分別為：補骨脂素：Y=8224.5X-48.132 6, r=0.999 9；異補骨脂素：Y=7 371.7X-52.475 2, r=0.999 9。
2.4 精密度實驗
精密吸取上述補骨脂素和異補骨脂素對照品溶液10 μl連續(xù)進樣5次，測得峰面積積分平均值補骨脂素為3 211.929，RSD為0.07%；異補骨脂素為3 676.707，RSD為0.16%，表明分析方法精密度良好。
2.5 重復(fù)性實驗
按照擬定的含量測定方法，對同一批樣品（批號：20061009）制備供試品溶液，平行操作6份，結(jié)果測得補骨脂素平均含量為0.075 mg·g-1，RSD為2.39%；異補骨脂素平均含量為0.072 mg·g-1，RSD為2.54%，表明本測定方法具有較好的重復(fù)性。
2.6 穩(wěn)定性實驗
精密吸取同一供試品溶液10 μl，在0，2，4，8，12 h分別進樣，記錄峰面積并計算RSD，結(jié)果：補骨脂素平均峰面積為1 330.393，RSD為0.46%；異補骨脂素平均峰面積為1 056.411，RSD為1.6%，表明樣品中補骨脂素和異補骨脂素在12 h內(nèi)穩(wěn)定。
2.7 專屬性實驗
取供試品溶液、對照品溶液、陰性對照溶液,按本色譜條件各進樣10 μl。結(jié)果見圖1。結(jié)果顯示，在本色譜條件下,陰性對照無干擾。
2.8 加樣回收率實驗
精密吸取已知含量的同一批樣品（20061009）10 ml，分別精密加入一定量的補骨脂素對照品和異補骨脂素對照品，按供試品溶液制備方法制備并測定，按公式回收率（P）(%)=(測得量-加入量)/樣品量×100%計算回收率。結(jié)果見表2。表明本方法具有良好的回收率。表1 骨康口服液中補骨脂素、異補骨脂素的HPLC測定梯度洗脫條件（略）表2 加樣回收率實驗結(jié)果（略）表3 樣品中補骨脂素、異補骨脂素含量測定結(jié)果（略）
2.9 樣品測定
取骨康口服液3批,照上述方法處理后測定,記錄峰面積,代入回歸方程計算樣品中補骨脂素和異補骨脂素的含量。結(jié)果見表3。
3 討論
3.1 提取溶媒的選擇
本品處方由多味中藥組成，且由水煎煮濃縮制得，活性成分多，極性強，影響鑒別的干擾因素較多。筆者曾用水直接稀釋樣品進樣分析，結(jié)果雜質(zhì)峰較多，分離效果差�？紤]到補骨脂素與異補骨脂素為呋喃香豆素類成分，因此采用乙醚提取。實驗結(jié)果表明，該法可使樣品中的補骨脂素與異補骨脂素提取完全。
3.2 流動相的選擇
目前《中國藥典》2005年版和文獻報道中HPLC法測定補骨脂素與異補骨脂素大多采用甲醇-水體系［6～9］，但經(jīng)過實驗發(fā)現(xiàn)，這些體系均不適用于該制劑的分析，本文選用乙腈-0.1%醋酸溶液梯度洗脫，可以同時測定補骨脂素與異補骨脂素的含量，且獲得較好的分離效果，且峰形更佳。本法操作簡便，精密度高，重現(xiàn)性好，是控制骨康口服液內(nèi)在質(zhì)量的有效方法。
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